Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
На миллиметровой бумаге с логарифмическим масштабом по обеим осям строят график со значениями Y/(1-Y) на оси абсцисс и количеством разведенного комплемента на оси ординат. Строят наилучшую прямую, соответствующую нанесенным точкам и определяют ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y) = 1,0. Вычисляют активность, в гемолитических единицах (СН50/мл) по формуле:
с,
Са • 5
где :
Сd - обратное значение разведения комплемента,
Са - объем, в мл, разведенного комплемента, приводящий к 50%
гемолизу,
5 - масштабный множитель для учета количества эритроцитов.
Испытание на антикомплементарную активность
Готовят разведение комплемента, содержащее 100 СН50/мл, путем разбавления титрованного комплемента морских свинок буферным раствором желатина и барбитала. При необходимости, доводят значение рН испытуемого иммуноглобулина до 7. Для иммуноглобулина с содержанием 50 мг/мл готовят следующие смеси для инкубации:
Таблица 2.6.17.-3
Испытуемый об Контроль комплемента
разец иммуногло (2 образца)
булина
Иммуноглобулин (50 мг/мл) 0,2 мл ---
Буферный раствор желатина и барби 0,6 мл 0,8 мл
тала
Комплемент 0,2 мл 0,2 мл
Проводят испытание испытуемого образца иммуноглобулина и готовят положительный и отрицательный контроли АКА с использованием стандартного образца человеческого иммуноглобулина BRP, в соответствии с указаниями на листке-вкладыше, сопровождающем стандартный препарат. Если концентрация иммуноглобулина отличается от 50 мг/мл, используют большие либо меньшие объемы образца и буферного раствора желатина и барбитала; например, при концентрации иммуноглобулина 30 мг/мл, к 0,33 мл его раствора добавляют 0,47 мл буферного раствора желатина и барбитала с получением 0,8 мл. Пробирки укупоривают и инкубируют при 370С в течение 60 минут. По 0,2 мл каждой из инкубированных смесей добавляют к 9,8 мл буферного раствора желатина и барбитала для разбавления комплемента. Вышеописанную операцию титрования комплемента проводят для каждой из пробирок, определяя остаточную активность ком-
племента (Таблица 2.6.17.-2). Антикомплементарную активность испытуемого препарата вычисляют относительно контроля комплемента, принимаемого за 100%, по формуле:
а - b___
-----100,
а
где :
а - средняя активность комплемента, в СН50/мл, в контролях
комплемента,
b - активность комплемента, в СН50/мл, в испытуемом образце.
Результаты испытания считают достоверными, если
- антикомплементарные активности, определенные для АКА-отрицательного и АКА-положительного контролей находятся в пределах, указанных в листке-вкладыше, сопровождающем стандартный образец,
- активность комплемента в контроле комплемента (а) находится в пределах от 80 до 120 СН50/мл.
2.6.18. ИСПЫТАНИЕ ЖИВЫХ ВИРУСНЫХ ВАКЦИН НА НЕЙРОВИРУЛЕНТНОСТЬ
В каждом испытании используют не менее десяти серонегативных по отношению к испытуемому вирусу обезьян. Каждой из обезьян в таламический отдел каждого полушария вводят не менее 0,5 мл испытуемого материала, если иное не предписано в частной статье. Общее количество привитого каждой обезьяне вируса не должно быть менее количества, содержащегося в рекомендованной единичной человеческой дозе вакцины. Для проверки наличия диких нейровирулент-ных вирусов контрольную группу, состоящую не менее чем из четырех обезьян, содержат в тех же клетках, что и группу привитых обезьян, или в непосредственной близости от них. Привитых обезьян наблюдают в течение 17-21 дней, отмечая возникновение паралича и других неврологических симптомов; обезьян из контрольной группы наблюдают в течение того же периода и дополнительно 10 дней. Животные, погибшие в течение первых 48 часов после инъекции, считаются погибшими по причинам неспецифического характера и могут быть заменены другими. Результаты испытания признают недостоверными, если: более 20% привитых обезьян погибают по неспецифическим причинам; образцы сыворотки, отобранные у обезьян контрольной группы, в момент прививки испытуемых животных и через 10 дней после умерщвления последних, имеют признаки инфекции, вызванной диким вирусом испытуемого типа или вирусом кори. По окончании периода наблюдения выполняют вскрытие и гистопатологическое изучение соответствующих отделов мозга на предмет наличия воздействия на центральную нервную систему. Материал выдерживает испытание, если не обнаруживается неожиданных клинических и гистопатологических признаков воздействия на центральную нервную систему, которые могут быть вызваны введенным вирусом.
